利来国际人结肠腺癌细胞LS1034培养说明书
一、细胞培养条件
细胞名称：人结肠腺癌细胞LS1034
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：第一次建议1:2传代
传代情况：每两天更换培养液
备注：用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡对比培养。如对比培养效果不理想，建议直接购买利来国际的完全培养基。
二、收到细胞后的处理
细胞状态良好后，立即灌满完全培养液并封好瓶口，这是一种确保运输细胞的最佳方法。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（推荐40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为售后服务的重要依据，若未提供照片，则默认细胞状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比，换液后请将瓶盖稍微松开。
三、细胞培养步骤
a. 细胞传代
若细胞汇合度未超过80%，收集瓶中的完全培养液至离心管中，留出5ml完全培养基，并放入37℃、5% CO2培养箱中培养；若细胞密度超过80%，则可以进行传代，具体步骤如下：
- 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞状态。当细胞大部分变圆并脱落时，迅速返回操作台，轻拍培养瓶后加入5ml完全培养基以终止消化。
- 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
- 按照1:2的比例对细胞悬液进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，然后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
b. 细胞冻存
- 当细胞生长覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
- 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使其脱落，转移悬液至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
- 弃去上清，加入1ml利来国际无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转至冻存管中。
- 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果后期需将细胞转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。
c. 细胞复苏
- 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中进行解冻，直至冻存管中无冰晶形成，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
- 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
- 弃去上清，再用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
- 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。
四、注意事项
有些细胞可能不牢靠，在运输过程中容易脱落，这种情况是正常的。如果细胞脱落较多，可以将培养瓶中的全部培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养（后期对比培养）。沉淀部分加入胰蛋白酶1-2 ml，轻轻吹打后进行消化1-2分钟，接着加入5ml完全培养基终止反应。再次离心后弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
五、售后条款
1) 细胞出现问题的重发情况
当出现如下问题时可申请重发：
- 细胞运输过程中出现如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等情况。
- 细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，通过核实后可申请重发。
- 常温发货的细胞静置24小时后以及干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，大多数细胞未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片。
- 如收到了干冰冻存发货的细胞复苏后24小时，或常温发货的细胞在静置4小时后未开封而出现污染，亦可重发。
- 如果细胞的活性存在问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法进行活力鉴定，通过核实可重发。
- 在收到细胞当天及第2、3天内需拍照，如未在三天内告知，视为产品合格；4-7天内问题需提供前三天照片以及详细操作步骤，并与技术人员沟通确认责任，技术人员判定责任后方可重发。
2) 不予重发的情况
出现以下情况时将不予重发：
- 客户自行造成的细胞污染。
- 客户操作不当导致细胞状态不佳。
- 使用非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳。
- 未提供细胞培养前三天的照片时，细胞状态不佳。
- 细胞培养期间经过其他处理的。
- 如细胞在收到2天内未告知相关问题。
- 视具体情况而定。
以上为利来国际人结肠腺癌细胞LS1034的培养说明书，遵循上述操作流程和注意事项，可以有效确保细胞的生长与应用。
津公网安备 12011302120117